血凝和血凝抑制试验在犬群暴发犬细小病毒肠炎中的应用

1977年，Eugster等人在美国，从一头出血性肠炎患犬的粪便中首次分离出犬细小病毒（Canine Parvirus，CPV）。1978年美国和加拿大等国家报道了犬的 CPV肠炎的流行。在以后很短的时间内，陆续由澳大利亚（1979）、比利时（1979）、法国（1980）、新西兰（1980）、英国（1979、1980）等许多国家和地区报告发生，目前本病几乎遍及全世界。 

1980年秋季以来，我国华东、西南、东北等地曾先后发生疑似本病的流行，但由于缺乏特异性诊断手段，所以进一步的研究无法深入。1983年元月，于华东某犬群中暴发了犬的传染性出血性肠炎，先后有94头犬患病。我们应用国内近期建立的血凝和血凝抑制试验，结合流行病学、临床症状、病理变化及电镜观察，证实本次流行的是犬的 CPV肠炎。本文应用血凝和血凝抑制试验，对该犬群的犬粪便中病毒性血凝素的效价变化规律进行研究，旨在探讨犬群感染时的犬粪便的血凝阳性结果与临床发病的关系，以及这两种试验在早期诊断方面的意义。 

材料与方法 

犬群概况 

该犬群共有187头犬，其中不足2月龄的仔犬19头，幼犬12O头，成年犬48头。这些犬是作为带仔犬、怀孕犬或成年犬而从国外或国内其他单位引进的，也有一部分是自产的。主要为狼种犬，还有部分小猎犬和民间土种犬。它们的饲养管理按月龄不同而异。部分1―2月龄幼犬迁于远离犬群10公里处群养， 3月龄以上的，除了群养外，还有部分由专人单个饲养管理。犬只身体状况基本良好。每年定期注射瘟热（哈尔滨兽医研究所制水貂犬瘟热疫苗）和狂犬病疫苗（上海生物制品研究所或郑州兽医生物制品厂制）一次，并及时进行断乳犬的防疫注射。该犬群从1980以来，曾发生6次疑似本病的流行，先后有116 头犬发病。但从1982年5月以来一直未见本病发生。1983年1月初，继1头具有 CPV肠炎典型症状的犬死亡后，迅速引起了犬群暴发性传染。在25天的时间内，即有94头发病。 

阳性抗原 

由兽医大学军事兽医研究所提供，经电镜证实实验感染犬的粪便提取物含有典型CPV颗粒，血凝（HA）效价>2048倍，可被8单位血凝抑制（HI）抗体完全抑制。 

阳性血清（HI抗体） 

取HI＞1280俗的CPV阳性灭活血清，加NaN3至0.05％即得。 

试剂与器材 

1.稀释液：O015M pH7.O PBS。 

2. BSA血球稀释血液: 1％BSA，即以PBS 1oooml加1.og牛血清白蛋白而成。 

3.1％猪红血球悬液：先于消毒注射器内吸入阿氏液3－5ml，再由健康成年白猪（60－70kg）耳静脉采血15ml，注入3－5倍量的阿氏液瓶中，混匀放4℃ ，可使用10天左右。使用前先用生理盐水将保存的血球沉淀洗涤3次，最后一次以3000rPm离心10分钟，弃上清，然后用BSA血球稀释液配制成1％悬液，放4℃ 备用。 

4．0.2M二硫基乙醇（2-ME）。 

5．96孔V型微量血凝板。 

6．0.025ml微量稀释棒。 

7.毛细滴管，每滴认0.025ml。 

8．微型血液震荡器。 

试验方法 

采集新鲜粪便和血清，按照夏咸柱等入叙述的方法处理后，作为待检样品，进行血凝和血凝抑制试验，亦按其标准进行结果判定。 

结果与讨论 

1．自然感染犬粪便HA阳性指标的确定 

有关HA阳性指标问题，国外报道还很不一致。我们对所有犬的粪便检查结果进行比较分析后，选取了具有代表意义的10份进行综合判定，确定了HA阳性指标为>8O倍。凡HA>80倍的犬，即可认为己受 CPV感染。所测近400份样品结果中无一表现高于＿80倍非特异性凝集。证明初步定8O倍的阳性标准较为适宜。 

2．不同年龄犬粪便的HA阳性率与其临床发病率之间的关系 

继第1头具有典型 CPV肠炎症状的犬死亡之后,几乎所有的犬都受到感染。但是，不同的犬，尤其是不同年龄的犬，易感性有明显差异，主要表现在其感染率（HA阳性率）和发病率的高低不同及其两者的关系上可以看出，小于2月龄的犬仅有31．3％受到感染，但无临床症状，这可能与特异性和非特异性母源抗体有关。1982年一次血清学调查结果表明，怀孕母犬的血液中也存在一定水平的HI抗体（大于或等于80 X），推断该地犬曾受过隐性感染或曾患此病，在本次流行过程中，小于2月龄的幼犬均未发病，亦证实了母源抗体的保护作用。 3－8月龄犬粪便HA阳性检出率高达 94.4―IO0％，发病率也较高（91．67－100％）。随着年龄的增长，犬体发育渐趋成熟，抗御感染能力亦渐增强，然而这些犬的HA阳性率和发病率都很高，可能是由于母源抗体降低或消失后而自身免疫机能尚未健全的缘故。在被检的成年犬中，虽见有5头HA效价超过16O X，但除1头表现一过性精神不振、发热、未加治疗即自愈外，其余均未见任何临床症状，证实成年犬存在隐性感染。 

3．HAT的早期诊断意义 

关于CPV肠炎的诊断，尽管有发热、呕吐、腹泻等特征性症状，但极易与犬传染性肝炎、犬温热、球虫病等相混淆，因此只有借助于特异性诊断手段才能确诊。在这方面，国外已有不少报告和评价，主要是电镜负染和免疫电镜观察、HA和HI试验、荧光抗体试验、免疫扩散试验、核内包涵体检查、血清中和试验。不少学者证实了HAT和HIT能快速、准确地诊断本病。从我门观察的情况来看，在本次流行中，粪便HA阳性检出率为73．73％，临床发病率为50．3％，两者之比为68／10O，因而可以认为，这种试验的结果是基本可信的。 

通过临床观察分析10头病犬的粪检结果，作者认为，HAT至少可以提前4天作出预报，这对于有针对性地采取早期治疗等措施，提高治愈率具有一定意义。 

4．自然感染犬的粪便排毒规律 

我们就自然感染犬的粪便排毒过程，进行了初步探讨。在分析所检测的全部样品结果的同时，重点处理了4头典型症状的发病犬的粪检结果，初步认为，在粪便首次出现HA阳性后第4―6天，病犬表现临床症状，第 13－15天痊愈，病程一般为1周，此期（第13―15天）为排毒盛期。

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